雙波長濾光片的應(yīng)用是為了消除樣品中對測定有干擾的物質(zhì)的影響,而實(shí)際應(yīng)用中選擇輔助波長主要用于消除脂血、溶血、黃疸的干擾。脂血樣品中的脂質(zhì)吸收光譜從300～600nm均有吸收,呈逐漸下降的趨勢;溶血樣品中的血紅蛋白在350nm、400nm、540nm、580nm有4個吸收峰;黃疸樣品中的膽紅素在300～500nm均有吸收,在400～500nm之間有強(qiáng)吸收峰。
一、生化儀雙波長測定中輔助波長的選擇：
雙波長濾光片的應(yīng)用是為了消除樣品中對測定有干擾的物質(zhì)的影響,而實(shí)際應(yīng)用中選擇輔助波長主要用于消除脂血、溶血、黃疸的干擾。脂血樣品中的脂質(zhì)吸收光譜從300～600nm均有吸收,呈逐漸下降的趨勢;溶血樣品中的血紅蛋白在350nm、400nm、540nm、580nm有4個吸收峰;黃疸樣品中的膽紅素在300～500nm均有吸收,在400～500nm之間有強(qiáng)吸收峰。由于脂血、溶血、黃疸樣品在較寬的波長范圍內(nèi)有較強(qiáng)的吸收光譜存在,因而常常同測定波長有重疊,此時測得的吸光度包含待測物質(zhì)的吸光度和干擾物質(zhì)的吸光度,選用輔助波長可消除干擾物質(zhì)的吸光度。在輔助波長選擇中,根據(jù)測定波長選擇輔助波長,要求干擾物質(zhì)在測定波長同輔助波長有相同的吸光度。例如:鉬酸銨法測定無機(jī)磷,其測定波長為340nm,對于溶血樣品,血紅蛋白在340nm有較強(qiáng)吸收,其吸光度同380nm處吸光度相同,選用380nm作輔助波長,用340nm和380nm兩波長的吸光度之差測定無機(jī)磷,可消除溶血對測定的干擾。
二、生化儀測定時間的選擇：
對于終點(diǎn)分析,測定時間的選擇應(yīng)充分考慮到干擾的問題。例如:溴甲酚綠法測定白蛋白選用一點(diǎn)終點(diǎn)分析法,白蛋白同溴甲酚綠反應(yīng)快,在一分鐘內(nèi)基本上反應(yīng)完全,隨著反應(yīng)時間的延長,α 球蛋白同溴甲酚綠反應(yīng)形成干擾,因而溴甲酚綠法測定白蛋白,其測定時間應(yīng)定于1分鐘。對于速率分析法,一般用于酶活力的測定,而酶活力的大小是用反應(yīng)速度來表示 ,因而要求在零級反應(yīng)期內(nèi)測定反應(yīng)速率,此時的反應(yīng)速率不受底物濃度的影響,僅同酶活力大小有關(guān)。因此,測定時間應(yīng)選在零級反應(yīng)期內(nèi)。對于一種物質(zhì)的測定,由于選擇試劑和分析方法不同,其測定時間也隨之變化,因而對于特定的試劑和分析方法,應(yīng)先做出反應(yīng)進(jìn)程曲線,從曲線上選擇最佳的測定時間。
三、生化儀樣品量和試劑量的選擇：
對于不同的全自動生化分析儀,其測定所需的反應(yīng)液總量不同。而試劑廠商給出了樣品量和試劑量的最佳比例,根據(jù)比例同時縮小或增加用量,同時滿足最小的反應(yīng)液總量。
