與傳統(tǒng)的染料分子相比，量子點(diǎn)具有多種優(yōu)勢(shì)，是一種理想的熒光探針。比如可承受多次激發(fā)和光發(fā)射；持久的穩(wěn)定性可以讓研究人員更長(zhǎng)時(shí)間地觀測(cè)細(xì)胞和組織；量子點(diǎn)色彩豐富，可觀察生物體系的復(fù)雜性。
量子點(diǎn)，又稱(chēng)為納米晶，是一種由II－VI族或III－V族元素組成的納米顆粒，其粒徑介于1～10nm之間。由于電子和空穴被量子限域，連續(xù)的能帶結(jié)構(gòu)變成具有分子特性的分立能級(jí)結(jié)構(gòu)，受激后可發(fā)射熒光。它具有以下主要性質(zhì)：
(l)量子點(diǎn)的發(fā)射光譜可通過(guò)改變量子點(diǎn)的尺寸和化學(xué)組分來(lái)控制，波長(zhǎng)覆蓋整個(gè)可見(jiàn)光區(qū)；
(2)量子點(diǎn)具有很好的光穩(wěn)定性，與最常用的有機(jī)熒光材料“羅丹明6G”相比，其熒光強(qiáng)度高20倍，穩(wěn)定性高100倍以上；
(3)量子點(diǎn)具有寬的激發(fā)譜和窄的發(fā)射譜，可以實(shí)現(xiàn)一元激發(fā)，多元發(fā)射，且多色量子點(diǎn)間不出現(xiàn)光譜交疊；
(4)量子點(diǎn)具有較大的斯托克斯位移，可以避免發(fā)射光譜與激發(fā)光譜的重疊；
(5)生物相容性好，量子點(diǎn)經(jīng)過(guò)各種化學(xué)修飾之后，可以進(jìn)行特異性標(biāo)記；
(6)量子點(diǎn)的熒光壽命長(zhǎng)。有機(jī)熒光染料的熒光壽命一般僅為幾納秒(這與很多生物樣本的自發(fā)熒光衰減的時(shí)間相當(dāng)），而量子點(diǎn)的熒光壽命可持續(xù)數(shù)十納秒（20ns∽50ns)，這使得光激發(fā)后，大多數(shù)生物自發(fā)熒光已經(jīng)衰變，而量子點(diǎn)熒光仍然存在，此時(shí)即可得到無(wú)背景干擾的熒光信號(hào)。
與傳統(tǒng)的染料分子相比，量子點(diǎn)具有多種優(yōu)勢(shì)，是一種理想的熒光探針。比如可承受多次激發(fā)和光發(fā)射；持久的穩(wěn)定性可以讓研究人員更長(zhǎng)時(shí)間地觀測(cè)細(xì)胞和組織；量子點(diǎn)色彩豐富，可觀察生物體系的復(fù)雜性。量子點(diǎn)特殊的光學(xué)性質(zhì)使得它在生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、藥物篩選、生物大分子相互作用等研究中有極大的應(yīng)用前景。
熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察
將直接法與間接法熒光染色的切片至于熒光顯微鏡下觀察，選擇激發(fā)波長(zhǎng)為UV<400nm，發(fā)射波長(zhǎng)為600nm。
注意事項(xiàng)
①整個(gè)染色過(guò)程中組織塊要保持濕潤(rùn)，不能干片，否則會(huì)導(dǎo)致非特異性染色。
②組織切片邊緣易干，因此抗體、封閉液、顯色液等試劑要充分覆蓋組織塊，避免干片。
1. 陽(yáng)性細(xì)胞判斷
610nm量子點(diǎn)在熒光顯微鏡下呈紅色。每批染色都要有特異性陽(yáng)性和陰性對(duì)照為基礎(chǔ)，才能對(duì)染色結(jié)果作出判斷。抗原表達(dá)必須在特定部位，對(duì)于臨床診斷來(lái)說(shuō)，不在抗原所在部位的陽(yáng)性著色，一概不能視為陽(yáng)性。盡量避開(kāi)出血、壞死及切片刀痕和界面邊緣細(xì)胞的著色多系內(nèi)源干擾或人為因素所致，不能視為陽(yáng)性。
2. 抗原表達(dá)評(píng)價(jià)
免疫熒光強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞密度是定性定量指標(biāo)，實(shí)際工作中常采用強(qiáng)度和密度結(jié)合的方法綜合計(jì)量，我們常用的免疫熒光組化評(píng)分方法如下：
定性：細(xì)胞免疫熒光強(qiáng)度評(píng)分：0（無(wú)熒光），1（弱熒光），2（中熒光），3（強(qiáng)熒光）；
定量：直接測(cè)定量子點(diǎn)的熒光強(qiáng)度。
腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性率評(píng)分：0（0~9%），1（10%~25%），2（26%~50%），3（51%~75%），4（76%~100%）
將熒光強(qiáng)度評(píng)分和陽(yáng)性細(xì)胞率評(píng)分的乘積作為該切片評(píng)分值。
